Monkeypox Virus CE ชุดตรวจหากรดนิวคลีอิก Fluorescence PCR Method

ชุดตรวจหากรดนิวคลีอิก Monkeypox Virus (วิธี Fluorescence PCR)

[ข้อมูลจำเพาะ]

24tests/kit, 48tests/kit, 96tests/kit

[ตั้งใจใช้]

ชุดนี้ใช้เพื่อตรวจหาคุณภาพ DNA ของไวรัส Monkeypox ที่สกัดจากตัวอย่างเลือด เซรั่ม หรือ lesion exudate ของผู้ป่วยที่ต้องสงสัยว่าติดเชื้อและผู้ป่วยรายอื่นที่ต้องวินิจฉัย

[หลักการ]

ชุดนี้ใช้เทคโนโลยี PCR เรืองแสงแบบเรียลไทม์เพื่อเลือกบริเวณที่มีการอนุรักษ์ของชิ้นส่วนกรดนิวคลีอิกของไวรัส Monkeypox เป็นพื้นที่เป้าหมายการขยายพันธุ์ ออกแบบไพรเมอร์เฉพาะและฉลากโพรบเรืองแสงที่แตกต่างกัน และใช้เทคโนโลยี RT-PCR เพื่อตรวจหาว่าตัวอย่างมีไวรัส Monkeypox หรือไม่ ดีเอ็นเอ.

[ส่วนประกอบ]

บันทึก:

ห้ามผสมส่วนประกอบจากแบตช์ที่ต่างกันสำหรับการตรวจจับ

รีเอเจนต์การสกัดกรดนิวคลีอิก: แนะนำรีเอเจนต์การสกัดกรดนิวคลีอิกที่ผลิตโดย Dewei

ไม่จำเป็นต้องใช้การสกัดกรดนิวคลีอิกเมื่อใช้การควบคุมเชิงบวก การสกัดกรดนิวคลีอิกเป็นสิ่งจำเป็นเมื่อใช้การควบคุมเชิงลบ

[การจัดเก็บและความเสถียร]

ชุดอุปกรณ์สามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20±5 ℃ ได้นาน 12 เดือน

เก็บชั่วคราวที่อุณหภูมิ 4 ℃ เป็นเวลา 7 วัน

การแช่แข็งและการละลายซ้ำไม่ควรเกิน 7 ครั้ง น้ำยาเปิดไม่ควรเกิน 7 ครั้ง

น้ำแข็งแห้งเพื่อให้ขนส่งที่อุณหภูมิต่ำไม่ควรเกิน 4 วัน

[เครื่องมือ]

เครื่องมือ PCR แบบเรียลไทม์ เช่น ABI7500, ABI7300, LightCycler480, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S และ QuantStudio

[การสุ่มตัวอย่างและการจัดการ]

• ประเภทของสิ่งส่งตรวจที่เหมาะสม: ตัวอย่างซีรัมและรอยโรค
  2. การรวบรวม: ควรเก็บตัวอย่างลงในหลอดปลอดเชื้อตามมาตรฐาน
  ข้อกำหนดทางเทคนิค.
  การเก็บรักษา: การเก็บตัวอย่างควรใช้สำหรับการตรวจจับทันทีหรือแช่แข็งที่
  ≤-20 °C ไม่เกินหนึ่งเดือน ควรหลีกเลี่ยงการแช่แข็งซ้ำและการละลาย
  3. การขนส่ง: ตัวอย่างควรขนส่งโดยใช้กล่องโฟมปิดผนึกด้วยน้ำแข็ง

[มาตรการ]

• การบำบัดตัวอย่างและการสกัดกรดนิวคลีอิก (พื้นที่บำบัดตัวอย่าง)

ขอแนะนำให้เก็บตัวอย่างของเหลว 200μL การควบคุมเชิงบวก และการควบคุมเชิงลบสำหรับการสกัดกรดนิวคลีอิก ตามข้อกำหนดและขั้นตอนที่สอดคล้องกันของชุดการสกัดดีเอ็นเอของไวรัส

• การเตรียมรีเอเจนต์ PCR (พื้นที่เตรียมรีเอเจนต์)

ใส่หลอด PCR ลงในถังปฏิกิริยาและตั้งชื่อของแต่ละปฏิกิริยาให้ดีตามลำดับที่เกี่ยวข้อง

นำ MVP PCR Reagent A และ B ออกจากชุด ละลายที่อุณหภูมิห้อง เขย่าและผสม ปั่นเหวี่ยงที่ 8,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลาสองสามวินาทีก่อนใช้งาน

ใช้หลอดปฏิกิริยา PCR N ชิ้น (N = จำนวนตัวอย่างที่จะทดสอบ + การควบคุมเชิงลบ + การควบคุมเชิงบวก)

การกำหนดค่าของระบบขยายสัญญาณเดียว MVP มีดังนี้:

หลังจากผสมส่วนประกอบต่างๆ อย่างทั่วถึงแล้ว ให้ปั่นแยกเป็นเวลาสั้นๆ เพื่อให้ของเหลวทั้งหมดบนผนังท่อถูกหมุนเหวี่ยงไปที่ด้านล่างสุดของท่อ จากนั้นจึงจ่ายระบบขยายเสียง 20 µl ลงในหลอด PCR

• การเก็บตัวอย่าง (พื้นที่เตรียมตัวอย่าง)

เพิ่ม 5µl ของการควบคุมเชิงลบที่ประมวลผลแต่ละรายการ กรดนิวคลีอิกของตัวอย่างที่จะทดสอบ และการควบคุมเชิงบวก MVP ไปที่หลอด PCR ด้านบน ขันฝาท่อให้แน่นและหมุนเหวี่ยงที่ 8,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลาสองสามวินาที จากนั้นโอนไปยังการตรวจจับการขยาย พื้นที่.

• การขยาย PCR (พื้นที่ขยาย)

ใส่หลอด PCR ลงในถังปฏิกิริยาและตั้งชื่อของแต่ละปฏิกิริยาให้ดีตามลำดับที่เกี่ยวข้อง

การตั้งค่าการตรวจจับเรืองแสง: (1) Monkeypox virus (FAM);(2) การควบคุมภายใน (CY5)

เรียกใช้โปรโตคอลการปั่นจักรยานต่อไปนี้: ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S และ QuantStudio โปรดดูคู่มือผู้ใช้เครื่องมือเพื่อการทำงานที่ดีขึ้น:

• การวิเคราะห์ผลลัพธ์ (โปรดดูคู่มือผู้ใช้เครื่องมือ)

หลังจากเกิดปฏิกิริยา ผลลัพธ์จะถูกบันทึกโดยอัตโนมัติคลิก “วิเคราะห์” เพื่อวิเคราะห์ จากนั้นเครื่องมือจะแปลค่า Ct ของแต่ละตัวอย่างในคอลัมน์ผลลัพธ์โดยอัตโนมัติผลการควบคุมเชิงลบและบวกจะต้องเป็นไปตามต่อไปนี้

"5. การควบคุมคุณภาพ".

• ควบคุมคุณภาพ

การควบคุมเชิงลบ: ไม่มี Ct หรือ Ct> 40 ในช่อง FAM, Ct≤40 ในช่อง CY5 พร้อมเส้นขยายปกติ

การควบคุมเชิงบวก: Ct≤35 ในช่อง FAM ที่มีเส้นขยายปกติ Ct≤40 ในช่อง CY5 ที่มีเส้นขยายปกติ

ผลลัพธ์จะถูกต้องหากตรงตามเกณฑ์ข้างต้นทั้งหมดมิฉะนั้น ผลลัพธ์จะไม่ถูกต้อง

[การตีความผลลัพธ์]

ผลลัพธ์ต่อไปนี้เป็นไปได้:

หมายเหตุ: หากผลลัพธ์ที่ไม่ถูกต้องเกิดขึ้น จะต้องเก็บตัวอย่างและทดสอบอีกครั้ง

[ข้อจำกัดในการตรวจจับ]

ผลการตรวจจับของชุดนี้ใช้สำหรับการอ้างอิงทางคลินิกเท่านั้น และไม่ควรใช้เป็นหลักฐานในการวินิจฉัยและการรักษาทางคลินิกโดยตรงควรพิจารณาการจัดการทางคลินิกของผู้ป่วยร่วมกับอาการ ประวัติการรักษา และประวัติการสัมผัส

ผลการตรวจจับอาจได้รับผลกระทบจากการดำเนินการ รวมทั้งการเก็บตัวอย่าง การจัดเก็บ และการขนส่งผลลบที่เป็นเท็จอาจเกิดขึ้นหากมีข้อผิดพลาดในการดำเนินการการปนเปื้อนข้ามระหว่างการบำบัดสิ่งส่งตรวจอาจนำไปสู่ผลบวกที่ผิดพลาด

[ข้อมูลจำเพาะด้านประสิทธิภาพ]

ขีดจำกัดการตรวจจับ: 500 สำเนา/มล.

ความแม่นยำ: ค่าสัมประสิทธิ์การแปรผัน (CV, %) ของค่า Ct ภายในชุด/ระหว่างชุดความแม่นยำคือ ≤5%

ความแม่นยำ: อัตราความสอดคล้องของการอ้างอิงเชิงลบ/บวก: 100%

ความจำเพาะ: ไม่มีปฏิกิริยาข้ามกับจีโนมมนุษย์และเชื้อโรคต่อไปนี้: ไวรัสไข้ทรพิษ, ไวรัสอีสุกอีใส, ไวรัสวัคซีน, ไวรัสอีสุกอีใส, ไวรัสตับอักเสบบี, ไวรัสตับอักเสบซี, ไวรัสภูมิคุ้มกันบกพร่องของมนุษย์, enterovirus

[ข้อควรระวัง]

• ผลิตภัณฑ์นี้ใช้สำหรับการทดสอบในหลอดทดลองเท่านั้นโปรดอ่านคู่มือนี้อย่างละเอียดก่อนใช้งาน
• ใช้หลอดและคำแนะนำที่ปราศจากเชื้อ ปราศจาก DNase และ RNase ระหว่างการตรวจจับ
• ระหว่างการตรวจจับ จำเป็นต้องหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้าม สวมอุปกรณ์ป้องกันที่เหมาะสม ถุงมือและหน้ากากแบบใช้แล้วทิ้ง และดำเนินการในตู้ความปลอดภัยทางชีวภาพให้เสร็จสิ้นเพื่อหลีกเลี่ยงสารอันตรายเข้าสู่ทางเดินหายใจ
• ในกรณีที่สัมผัสกับผิวหนังและเยื่อเมือกระหว่างการใช้งาน โปรดล้างออกทันทีด้วยน้ำไหล ซึ่งจะไม่เป็นอันตรายต่อผู้ปฏิบัติงาน

รีเอเจนต์เหลวทั้งหมดควรละลายจนหมดและผสมที่อุณหภูมิห้องก่อนใช้งาน และปั่นเหวี่ยงที่ 8,000 รอบต่อนาทีเป็นเวลาสองสามวินาทีก่อนใช้งาน

หลังการใช้งาน บรรจุภัณฑ์และของเสียของเหลวต้องได้รับการปฏิบัติอย่างสม่ำเสมอเหมือนของเสียทางการแพทย์ เพื่อป้องกันมลพิษ